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Grado en Química

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28 

 

 

7. -

 

¿Por qué el inyector de un cromatógrafo de gases se calienta a 

temperaturas relativamente altas? 

 

 

 

 

 

8. -  ¿Qué es un programa de temperaturas y cuál es su finalidad? 

 

 

 

 

 

 

 

Observaciones:…………………………………………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………. . .   

………………………………………………………………………

……

 

 


 

29 

 

 

QUIMICA ANALÍTICA II

 

Grado en Química 

2º Curso 

 

Práctica nº 5 

 

DETERMINACIÓN DE CAFEÍNA EN DIFERENTES MUESTRAS 

(CAFÉ, TÉ Y BEBIDAS DE COLA) MEDIANTE HPLC CON 

DETECCIÓN UV 

 

OBJETIVO  

 

1. 

 

F

amiliarizar al alumno con  la cromatografía de líquidos de alta resolución 

(HPLC): manejo de la instrumentación, preparación de la fase móvil, control del 

flujo de fase móvil, detección. 

 

2.  Aplicación de la técnica a la determinación de la concentración de cafeína en 

diferentes muestras (café, té y bebidas de cola) por HPLC en fase inversa. 

 

 

INTRODUCCIÓN 

 

El método tradicional para la determinación de cafeína es medir su 

absorbancia con un espectrofotómetro. La Cromatografía Líquida de Alta 

Resolución (HPLC) es un método de separación que se utiliza fundamentalmente 

para la determinación de sustancias no volátiles, generalmente polares y/o 

térmicamente lábiles. Con HPLC se consigue separar más fácil y rápidamente la 

cafeína de otras sustancias, tales como: 

ácido tánico, ácido cafeico y azúcares, que 

también se encuentran en este tipo de bebidas. 

 

Una vez conectado el cromatógrafo y estabilizado el flujo, se procede a la 

inyección de disolución patrón de cafeína de distintas concentraciones (2 

inyecciones por lo menos de cada nivel). De los cromatogramas resultantes se 

obtienen los datos de tiempo de retención (

t

)

 

área de pico

. Si el flujo y la 

presión de la bomba se han mantenido constantes a lo largo de todo el 

experimento, 

t

R

  

podrá utilizarse como medida cualitativa y el 

área de pico

  como 

medida cuantitativa. Se construye la curva de calibrado (área de pico vs. 

concentración de los patrones de cafeína) y posteriormente se inyecta la muestra, 

pudiéndose calcular la concentración del analito presente en la misma.  



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