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Grado en Química

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31 

 

 

a) Encender la bomba:  Fase móvil: Metanol / agua Milli-Q (30:70) 

acidulada a pH 3.5  

 

Flujo: 2.0 mL/min. 

 

b) Encender el detector de absorbancia: Longitud de onda: 254 nm 

c) Enceder ordenador e impresora 

 

[Antes de inyectar los patrones en la columna, dejar pasar fase móvil durante 5-10 

min, registrando simultáneamente la respuesta en el detector, para asegurarse de 

que no quedaron sustancias retenidas en la columna procedentes de experimentos 

previos y de que la línea de base es estable]. 

 

4.- Realizar 2 inyecciones de cada nivel de concentración de cafeína, de menor a 

mayor concentración: cargar la muestra con la válvula en posición LOAD (20 µL) e 

inyectar girando a la posición  INJECT. 

 

5.- Preparación de las muestras de bebida: 

 

 

Café: 0.5 g de café en 150 mL de agua caliente. Tomar 10 mL de café, 

enrasar a 25 mL con metanol/agua/acético (30:69,9:0,1) y filtrar 5 mL 

de la disolución resultante. 

  

 

Té: 1 bolsa en 150 mL de agua caliente. Tomar 7-10 mL de té, enrasar a 

25 mL con metanol/agua/acético (30:69,9:0,1) y filtrar 5  mL de la 

disolución resultante. 

 

 

Bebidas de cola: 15 mL de bebida de cola (Eliminar carbónico por 

agitación con varilla). Inyección directa, filtrando. 

 

6.- Inyectar las muestras de bebida por duplicado. 

 

 

TRATAMIENTO DE LOS DATOS Y CUESTIONES 

 

Tratamiento de los datos: 

1.  Determinar a partir del tiempo de retención medio del pico de cafeína 

patrón qué pico en el cromatograma de la muestra es originado por la 

cafeína.  

2.  Construcción de la curva de calibrado: área del pico frente a concentración. 

3.  Calcular la concentración de la muestra según la curva de calibrado: tomar 

el área de pico de la muestra e interpolar el valor en la curva de calibrado 

para determinar la concentración de cafeína en mg/mL. Calcular la media y 

desviación estándar. Incluir correcciones por dilución en los cálculos.  

 

Práctica  5:  Determinación de cafeína en diferentes muestras (café,  té y 


 

32 

bebidas de cola) mediante HPLC con detección UV  

 

Grupo: …………… 

Nombres 

…………………………………………………………. . .  

 

 

 

 

 

…………………………………………………………. . .  

 

1 . -  Identificación de la cafeína en el cromatograma: 

 

2. -  Rectas de calibrado (ajuste por mínimos cuadrados): 

Cafeína 

Área (iny 1) 

Área (iny 2)  Área (iny 3) 

 

Nivel 1  

 

 

 

 

Nivel 2 

 

 

 

 

Nivel 3 

 

 

 

 

Nivel 4 

 

 

 

 

Nivel 5 

 

 

 

 

 

Ecuación de la recta Cafeína 

R

2

 

3. -  Cálculo de las concentraciones de cafeína en las muestras problema: 

 

 

 

 

  

 

 

Muestra Problema :         …………….  ± ………….  mg/mL Cafeína 

 

 

 

 

…………….  ± ………….  mg/mL Cafeína 

 

 

 

 

…………….  ± ………….  mg/mL Cafeína 

 

 

Nota: Incluir todas las representaciones gráficas 

 

 

Cuestiones 

Medida de la 

muestra 

Área (iny 1)  Área (iny 2)  Área (iny 3)   

Café 

 

 

 

 

Te 

 

 

 

 

Cola 

 

 

 

 


 

33 

1 . -  ¿A qué término inglés corresponden las siglas HPLC y cuál es su 

significado?  

 

2. -  ¿En qué se diferencian HPLC en fase normal y en fase inversa? 

 

 

 

 

3. -  ¿En qué se diferencian elución isocrática y elución en gradiente? Y ¿en 

qué se parecen la elución en gradiente en HPLC y la programación de 

temperaturas en GC?.  

 

 

 

 

 

4. -  Los picos (más o menos definidos) que aparecen antes de la cafeína en las 

inyecciones de las muestras: ¿A qué pueden deberse? ¿Son más o menos 

polares que la cafeína?.  

 

 

 

 

Observaciones:…………………………………………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………. . .   

………………………………………………………………………

……

 

 


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