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Capítulo veintiuno

CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS

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Debido a su rapidez y sensibilidad, así como a su amplio espectro de aplicaciones, a partir 

de su desarrollo la cromatografía de gases (GC, gas chromatography) se ha ido utilizando 

cada vez más que las diferentes técnicas de cromatografía de líquidos. Empero, la cromato-

grafía de líquidos tiene un potencial de aplicaciones más amplio debido a que 85% de los 

compuestos conocidos no son lo suficientemente volátiles o estables como para ser separa-

dos por cromatografía de gases. La riqueza acumulada por la teoría de la cromatografía, en 

especial de parte de la cromatografía de gases, ha conducido al desarrollo de los métodos de 

cromatografía de líquidos de alta eficiencia (HPLC, high-performance liquid chromato-

graphy) que rivaliza en eficiencia con la cromatografía de gases y permite hacer  separaciones 

y mediciones en cuestión de minutos. La causa de la rápida aceptación de la cromatografía 

de gases en la década de 1950 fue su aplicación inmediata en la industria petroquímica. En 

cambio, la aplicación de la HPLC en la industria farmacéutica se convirtió en el pilar de los 

laboratorios farmacéuticos en la década de 1970, y hoy día el mercado de nuevos instrumen-

tos de HPLC es mayor que el más maduro de la cromatografía de gases.

En este capítulo se describirán los principios de la técnica de HPLC y los desarrollos 

responsables del fenómeno; también los métodos de la cromatografía de líquidos normal y 

de fase inversa (separaciones basadas en polaridad), la cromatografía por exclusión de tamaño 

(separaciones basadas en tamaños moleculares) y la cromatografía de intercambio ióni-

co (separaciones basadas en cargas eléctricas). Asimismo, la cromatografía en capa delgada, 

de forma plana, además de la electroforesis, en la que las separaciones se obtienen con un 

gradiente de campo eléctrico basadas en el signo y la magnitud de la carga del analito.

21.1  Cromatografía de líquidos de alta eficiencia

En 1964, J. Calvin Giddings, de la Universidad de Utah, publicó el artículo “Comparación 

entre el límite teórico de capacidad de separación en la cromatografía de gases y de líqui-

dos” [Anal. Chem., 36 (1964) 1890]. Hasta esos días, la cromatografía de líquidos conven-

cional se hacía en columnas grandes, con partículas grandes y con alimentación por gra-

vedad; las fracciones de eluyentes se recolectaban manualmente para su medición en un 

espectrofotómetro. Giddings previó que el desempeño de la cromatografía de líquidos 

sería mejor si se pudieran usar partículas pequeñas, bajo mayor presión de flujo, con lo 

que teóricamente se podrían obtener números muy altos de placas. Un par de años después, 

Csaba Horvath y su colega S. R. Lipsky, de la Universidad de Yale, construyeron el primer 

equipo de HPLC, y lo llamaron “cromatografía de líquidos de alta presión”. Pero no fue 

La técnica de HPLC es el aná-

logo de la cromatografía de ga-

ses, pero en fase líquida. El 

secreto de su éxito son las partí-

culas pequeñas y uniformes que 

producen poca difusión arremo-

linante y su rápida transferencia 

de masa.

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