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21.1  CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTA EFICIENCIA

 

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sino hasta los primeros años de la década de 1970, con el desarrollo de la tecnología para 

producir pequeñas partículas de sílice silanizadas, que fue posible usar las columnas de 

volumen pequeño y mayor longitud que permitieron un funcionamiento con alta resolución. 

Hoy en día, a este método se le llama “cromatografía de líquidos de alta eficiencia”.

PRINCIPIOS

La cromatografía de líquidos clásica ha sido sustituida en gran medida por la técnica, 

mucho más poderosa y analíticamente útil, de la cromatografía de líquidos de alta eficien-

cia. La figura 21.1 muestra los componentes básicos de un sistema de HPLC, y la figura 

21.2 ilustra un moderno cromatógrafo de HPLC. Estos instrumentos tienden a armarse en 

forma modular, a diferencia de la mayor parte de los instrumentos de GC, y permiten que 

el usuario cambie diversos componentes.

La rapidez de distribución de solutos entre la fase estacionaria y la fase móvil, en la 

cromatografía de líquidos tradicional, está controlada por difusión principalmente. La di-

fusión en los líquidos es en extremo lenta, en comparación con los gases. Para minimizar 

la difusión y el tiempo requerido para el movimiento de los componentes de la muestra 

hacia los sitios de interacción en la columna y desde éstos, deben satisfacerse dos criterios. 

El primero es que el material de empaque debe estar finamente dividido y tener una alta 

regularidad esférica para permitir una óptima homogeneidad y densidad de empaque; en 

segundo lugar, la fase estacionaria debe estar en forma de una película delgada y uniforme, 

sin lugares para el estancamiento. La primera condición permite tener menor valor de A 

en la ecuación de Van Deemter (menor difusión por arremolinamiento) y la segunda da 

como resultado un valor pequeño de C (transporte de masa más rápido entre las fases, 

necesario para tener gran rapidez de flujo). Debido a que la difusión molecular en líquidos 

es pequeña, el término de la ecuación 19.8 es pequeño. Por tanto, el aumento perjudicial 

en H a tasa baja lenta no sucede como en la figura 19.4. Esto se ilustra en la figura 21.3, 

y está expresado por la ecuación de Huber (ecuación 19.21) y por la ecuación de Knox 

(ecuación 19.23) en el capítulo 19.

La difusión molecular o longitu-

dinal en los líquidos es lenta, y 

se puede despreciar.

La transferencia de masa es el 

determinante primario de en 

HPLC.

Recipientes de disolvente

Válvula de

varias vías

Volumen

amortiguador

Amortiguador

de pulsos

Bomba

Cabeza de inyección

Guarda

columna

Columna

Tubo capilar

conector

Detector

Registrador

Figura 21.1. 

Componentes 

básicos de un cromatógrafo de 

líquidos de alta eficiencia. 

(Adaptado de Analabs, Inc. 

Research Notes. Copyright © 

1971. Reproducido con autori-

zación.)

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