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21.1  CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTA EFICIENCIA

 

611

3. Columna.  Los tramos rectos de tubo de acero inoxidable permiten la construcción de 

columnas excelentes (véase figura 21.9). Son de varios diámetros y longitudes, los cuales 

dependen de la aplicación. En general, el diámetro interno tiene 3.9 o 4.6 mm. Una columna 

de 4.6 mm de diámetro, bien empacada con partículas de 5 

m (d

p

) debe tener un número 

de platos del orden de 60 000 a 90 000 placas/metro, a flujos de 1 mL/min. Una columna 

convencional de 15 cm de longitud con 4.6 mm de diámetro interior tiene 15 000 platos, con 

partículas de 3 

m, 9 000 platos con partículas de 5 m y 5 000 platos con partículas de 

10 

m. Las partículas menores se limitan a longitudes de 25 cm o menos, por las grandes 

caídas de presión. Con 25 cm es posible tener 50 000 placas a una presión de 5 000 psi, 

y con mezclas de agua-metanol. Pueden resolver 50 a 100 máximos, que es más o menos 

el límite superior de la cromatografía de líquidos de alta eficiencia convencional. Más 

adelante se verá que puede hacerse cromatografía rápida con columnas de mayor diámetro 

y cortas, pero las columnas delgadas producen mayor resolución.

A continuación se describirán algunas reglas para seleccionar las fases estacionarias 

y móviles en columnas. En general, no es necesario controlar la temperatura en la croma-

tografía líquido-sólido, a menos que deba trabajarse a temperaturas elevadas; pero en gene-

ral sí se requiere para otras formas de cromatografía de líquidos (líquido-líquido, exclusión 

de tamaño, intercambio iónico). Algunos detectores, en especial los refractómetros, son muy 

Admisión

de la

muestra

Salida de

la muestra

Columna cromatográfica

Admisión

del eluyente

Admisión

del eluyente

b

) Inyección de la muestra

a

) Llenado del circuito con la muestra

Circuito de la muestra

Admisión

de la

muestra

Salida de

la muestra

Figura 21.8. 

Inyector de cir-

cuito de la muestra. (Según D. 

C. Scott, en Modern Practice 

of Liquid Chromatography, J. 

J. Kirkland, ed., Nueva York: 

Wiley-Interscience, 1971. Con 

autorización.)

Figura 21.9. 

Columnas para 

HPLC. (Cortesía de Waters 

Corporation.)

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