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21.1  CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTA EFICIENCIA

 

617

la misma sensibilidad en las columnas convencionales si se inyecta una muestra cinco 

veces mayor, 20 

L. Así, en realidad sólo cuando la muestra es limitada se aprovecha la 

ventaja de la sensibilidad, pero se reduce el disolvente a la quinta parte. Los volúmenes 

de muestra inyectados en las columnas de 2.1 mm no deben ser mayores a 5 

L para 

minimizar la influencia de la inyección sobre los volúmenes de los máximos. Y el volumen 

de la celda de flujo debe ser de 3 a 5 

L. La aplicación principal de esas columnas es 

cuando se interconectan con un espectrómetro de masas (líquidos-masas, véase más ade-

lante) debido a los menores volúmenes de máximo y la baja rapidez de flujo volumétrico 

necesaria para su introducción al espectrómetro de masas.

Ejemplo 21.1

Calcular el volumen, en microlitros, de una zona de muestra que corresponda a 1 mm en: 

a) una columna de 2.1 mm de diámetro interno (d.i.) y b) una de 4.6 mm de diámetro 

interno, suponiendo que la fase móvil ocupa 65% del volumen de la columna.

Solución

a)

  Calcular el volumen en cm

3

 y usar dimensiones en centímetros:

V 

lr

2

 

 0.1 cm  3.14 (0.105 cm)

2

 

 0.0035 cm

3

 

 3.5 L

Como la fase móvil ocupa 65% del volumen, se multiplica por 0.65 para obtener el 

volumen real:

3.5 

L  0.65  2.3 L

b)

 

 0.1 

cm 

 3.14 (0.23 cm)

2

 

 0.65  0.0108 cm

3

 

 10.8 L

Eso significa que la altura del máximo será la misma con una columna de 2.1 mm 

de diámetro interno para una muestra de 2.3 

L, que para una columna de 4.6 mm de 

diámetro interno con una muestra de 10.8 

L, cerca de la quinta parte del tamaño 

de la muestra. También significa que no se requiere una columna pequeña para tener 

alta sensibilidad si la muestra no se encuentra limitada.

Ejemplo 21.2

Si la rapidez óptima de flujo volumétrico para una columna de 4.6 mm de diámetro interno 

es 1.5 mL/min con partículas de 5 

m, ¿cuál sería para una columna de 2.1 mm de diá-

metro interno con las mismas partículas? ¿Cuánto disolvente se consumiría para tener una 

separación de 10 min con cada columna?

Solución

La rapidez de flujo es proporcional a la raíz cuadrada del diámetro interno de la co-

lumna:

 

Rapidez de flujo (2.1 mm diámetro interno) 

 1.5 mL/min  

(2.1 mm)

2

(4.6 mm)

2

 

 0.31 mL/min

Para la columna de 4.6 mm de d.i. se usarían 15 mL de disolvente, en tanto que para la 

de 2.1 mm de d.i. sería la quinta parte.

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