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en columnas abiertas con alimentación por gravedad para separaciones de preparación, y 

para separaciones de alta eficiencia. Estas mallas son carbohidratos poliméricos y acrila-

midas que tienen una red abierta formada por el entrecruzamiento de cadenas poliméricas. 

Son hidrofílicas, por lo que son capaces de absorber agua e hincharse, causando la abertura 

de su estructura. El grado de entrecruzamiento determina el tamaño de los “agujeros”.

Las moléculas solvatadas mayores que los poros más grandes del gel hinchado no 

pueden penetrar en éste, por lo que atravesarán la columna por los espacios que hay entre 

las partículas individuales. Sin embargo, las moléculas más pequeñas sí penetrarán el área 

abierta en las partículas en grado variable, lo cual dependerá de su tamaño y forma. En 

consecuencia, se retardarán en distintos grados y se eluirán por tamaño molecular decre-

ciente. Los geles con alto grado de hinchamiento se usan para fraccionar moléculas gran-

des (en general de sustancias de alto peso molecular), en tanto que los más densos (de 

menor hinchamiento) se usan para separar compuestos de menor peso molecular.

Los bioquímicos usan nombres como cromatografía por filtración en gel (la fase 

móvil es agua) y cromatografía por permeación en gel (la fase móvil es un disolvente 

orgánico) para describir este método. Sin embargo, el término recomendado es cromato-

grafía por exclusión de tamaño. Con esta técnica se puede obtener la distribución de 

pesos moleculares de los polímeros, y se pueden separar proteínas, enzimas, péptidos, 

ácidos nucleicos, hormonas, polisacáridos, etcétera.

El  límite de exclusión es el peso molecular de moléculas que se encuentran en el 

límite para permear el gel y ser retardadas. Este peso puede variar desde 1 000 hasta varios 

millones, dependiendo del gel. Se debe subrayar que las separaciones se basan en el tamaño 

y configuración de las moléculas, y no sólo en su peso molecular, aunque por lo regular 

están correlacionados. En general, las  moléculas de tamaño por debajo del límite de ex-

clusión se pueden fraccionar hacia abajo hasta cierto tamaño límite (véase la tabla 21.1).

Los geles se deben equilibrar durante algunas horas o hasta un día o más con el 

disolvente que se vaya a utilizar, dependiendo de la absorción del disolvente. Los que 

tienen pocos entrecruzamientos diseñados para sustancias de alto peso molecular requieren 

periodos mayores de humidificación.

Un material muy usado en las mallas moleculares para separar proteínas es el Se-

phadex. Se trata de un carbohidrato polimérico que, debido a sus grupos hidroxilo a lo 

largo de la cadena polimérica, es altamente polar y por tanto adsorbe agua. La cantidad 

Las proteínas se pueden separar 

por cromatografía de exclusión 

molecular.

Tabla 21.1

Características de Sephadex Gel

a

 y Bio-Gel

b

 Intervalo 

de

 fraccionamiento

c

 para 

 

Intervalo de

 

péptidos y proteínas 

 

fraccionamiento

Tipo de Sephadex 

globulares (PM) 

Tipo de Bio-Gel 

(PM)

G-10 Hasta 

700 

P-2 

100-1 

800

G-15 Hasta 

500 

P-4 

800-4 

000

G-25 

1 000-5 000 

P-6 

1 000-6 000

G-50 

1 500-30 000 

P-10 

1 500-20 000

G-75 

3 000-70 000 

P-30 

2 500-40 000

G-100 

4 000-150 000 

P-60 

3 000-60 000

G-150 

5 000-400 000 

P-100 

  5 000-100 000

G-200 

5 000-800 000 

P-150 

15 000-150 000

 

 

P-200 

30 000-200 000

 

 

P-300 

60 000-400 000

a

Cortesía de Pharmacia Fine Chemicals, Inc.

b

Cortesía de Bio-Rad Laboratories.

c

El límite superior es el límite de exclusión.

21.2  CROMATOGRAFÍA POR EXCLUSIÓN DE TAMAÑO

 

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