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CAPÍTULO 21 

CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS

de entrecruzamiento se puede controlar con cuidado en la preparación para obtener dife-

rentes tamaños de poro y límites de exclusión. Los geles se caracterizan de acuerdo con 

su capacidad de hinchamiento debida a su “ganancia de agua”. Esto representa la cantidad 

de agua embebida en los geles al hincharse. Los números de los geles Sephadex indican 

los valores de ganancia de agua. Así, el Sephadex G-10 tiene un valor de ganancia de agua 

aproximado de 1 mL/g de gel seco, y el valor para Sephadex G-200 es alrededor de 20 

mL/g. En la tabla 21.1 se ven varios tipos de gel Sephadex, y los tamaños moleculares que 

fraccionan. Estos geles son insolubles en agua y son estables frente a agentes redox mo-

derados, y también frente a bases y ácidos débiles.

Bio-Gel es una serie de geles para cribado molecular con mayor inercia química 

formados por poliacrilaminas. Son insolubles en agua y en disolventes orgánicos comunes, 

y se pueden usar en un intervalo de pH de 2 a 11. Con el gel inerte disminuye la posibi-

lidad de adsorber sustancias polares; la adsorción tal vez sea una de las variables con 

Sephadex, ya que puede causar cambios en el comportamiento cromatográfico de estas 

sustancias. En la tabla 21.1 se presentan diferentes preparaciones de Bio-Gel y sus propie-

dades de separación.

El  Styragel es un gel de poliestireno adecuado para separaciones puramente no 

acuosas en cloruro de metileno, tolueno, triclorobenceno, tetrahidrofurano, cresol, dime-

tilsulfóxido, etc. No se puede usar con agua, acetona o alcoholes. Sus geles se pueden 

preparar con límites de exclusión para pesos moleculares de 1 600 a 40 millones.

Las mallas moleculares son adecuadas para desalinizar proteínas que se fraccionaron 

parcialmente por efecto de un salado con alta concentración de alguna sal. Un gel con bajo 

límite de exclusión, como el Sephadex 25, permite que las proteínas pasen por la columna 

mientras que las sales quedan retenidas. La dilución de la proteína se limita al volumen 

de elución de la columna (el volumen externo del gel hinchado que llena la columna).

En aplicaciones analíticas de alta eficiencia se usan pequeñas partículas de poliesti-

reno o de sílice microporosa, de 5 a 10 

m de diámetro, con tamaño de poro desde unos 

pocos hasta varios cientos de nanómetros. Las partículas de sílice de poro controlado se 

recubren con una fase hidrofílica para reducir la adsorción de soluto. Las partículas poli-

méricas pueden usarse en un intervalo más amplio de pH (de 2 a 12), dado que la sílice 

se encuentra limitada a pH de 2 a 7.

21.3  Cromatografía de intercambio iónico

Aunque casi todos los demás tipos de cromatografía se usan principalmente para separar 

sustancias orgánicas complejas, la cromatografía de intercambio iónico se ubica en parti-

cular para separar iones inorgánicos, tanto cationes como aniones, porque esta separación 

se basa en el intercambio de iones en la fase estacionaria. También ha demostrado ser en 

extremo útil para separar aminoácidos.

En la cromatografía de intercambio iónico, la fase estacionaria está formada por 

perlas de un polímero de poliestireno entrecruzado con divinilbenceno. Este polímero 

(resina) tiene grupos fenilo libres unidos a la cadena que se pueden tratar con facilidad 

para agregarles grupos funcionales. Básicamente hay cuatro tipos de resinas de intercam-

bio iónico que se usan en química analítica, y se presentan en la tabla 21.2. Como la 

cromatografía por exclusión de tamaño, la de intercambio iónico se usa en columnas em-

pacadas de tubo abierto y alimentadas por gravedad, o en un modo de alta eficiencia co-

nocido como cromatografía iónica (que se describe adelante).

RESINAS INTERCAMBIADORAS DE CATIONES

Esas resinas contienen grupos funcionales ácidos unidos al anillo aromático de la resina. 

Los intercambiadores de cationes ácidos fuertes tienen grupos sulfónico, ¬SO

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H, que son 

Los cationes y aniones se sepa-

ran mediante cromatografía de 

intercambio iónico.

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