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Las partículas tan finas que se usan en la HPTLC (high-performance thin layer 

chromatography, cromatografía en capa delgada de alta eficiencia) hace más lento el mo-

vimiento de la fase móvil, después de una distancia relativamente corta. Para evitarlo, se 

ha empleado una técnica de “flujo forzado” usando una cámara de presión. La fase móvil 

se dosifica con ayuda de una bomba a velocidad constante a través de una rendija bajo una 

hoja de plástico que cubre la fase estacionaria. Para conocer los detalles, consultar los 

estudios de Kalász y colaboradores [J. Chromatogr. Sci.18 (1980) 324; Chromatographia

18 (1984) 628].

La cromatografía moderna de capa delgada puede complementar la HPLC. Permite 

procesar muchas muestras en paralelo, con análisis de bajo costo de mezclas simples para 

las cuales es alta la carga de trabajo de muestras. Las placas de cromatografía de capa 

delgada funcionan como “detectores de almacenamiento” del analito si éstas se guardan.

21.6 Electroforesis

Con los métodos de electroforesis se separan las sustancias de acuerdo con sus relaciones 

de carga a masa usando el efecto de un campo eléctrico sobre las cargas de esas sustancias. 

Estos métodos se usan mucho para separar partículas coloidales cargadas o iones macro-

moleculares, como los de proteínas, ácidos nucleicos y polisacáridos. Hay varios tipos de 

electroforesis, y la electroforesis de zona es uno de los más comunes.

En la electroforesis de zona, las proteínas están suspendidas en un sólido, de manera 

que además de las fuerzas eléctricas de migración, las fuerzas cromatográficas convencio-

nales pueden influir sobre la eficiencia de la separación. Hay varios tipos de electroforesis 

de zona, de acuerdo con los diferentes soportes. Entre los soportes comunes están los 

geles de almidón, geles de poliacrilamida, espuma de poliuretano y papel. La electrofore-

sis en gel de almidón es una técnica difundida, aunque hoy ha sido sustituida en parte por 

el uso de los geles de poliacrilamida que minimizan los efectos de convección y difusión. 

Se prepara un bloque o “placa” de gel de almidón y la muestra se aplica en forma de una 

banda angosta (línea) que cruza el bloque, más o menos a la mitad entre sus lados. Cuando 

se hace pasar corriente por la celda, los diversos componentes de las mezclas se mueven 

con velocidades que dependen de sus cargas eléctricas, tamaños y formas. Al avanzar la 

electroforesis, los componentes con carga negativa migran hacia el ánodo, y los que tienen 

carga positiva migran hacia el cátodo. El resultado es una serie de bandas o líneas sepa-

radas debidas a los componentes de la muestra, que se visualizan como una mancha.

Se pueden resolver mezclas muy complejas con electroforesis de zona. Por ejemplo, 

la separación electroforética en gel de almidón de las proteínas plasmáticas muestra 18 

componentes. Para medir la intensidad de las zonas coloreadas y con ella obtener infor-

mación cuantitativa se puede usar un densitómetro. La electroforesis capilar en gel es una 

poderosa variante de este método (se describe más adelante).

La velocidad de migración de cada sustancia depende del voltaje aplicado y del pH 

de la solución amortiguadora empleada. El voltaje aplicado se expresa en voltios por cen-

tímetro. Es hasta de 500 V en electroforesis de bajo voltaje, y puede ser de varios miles 

de voltios en la electroforesis con alto voltaje. Esta última se usa para tener separaciones 

rápidas de sustancias de bajo peso molecular. Las macromoléculas tienen menores movi-

lidades iónicas y son menos propensas a separaciones con alto voltaje.

La electroforesis de zona se usa principalmente en química clínica y en bioquímica 

para separar aminoácidos y proteínas. Estas sustancias contienen grupos amino y carboxilo, 

que pueden ionizarse o protonarse dependiendo del pH. A cierto pH, la carga neta de un 

aminoácido es cero, y existe en forma de zwitterión (véase el capítulo 8) que no tiene 

movilidad electroforética. Este pH es el punto isoeléctrico del aminoácido.

En el capítulo 25 se describirá el uso de la electroforesis en gel para separar ácidos 

nucleicos en la secuenciación de ADN.

Las moléculas grandes, como 

las de proteínas, migran en un 

campo eléctrico de acuerdo con 

sus relaciones de carga a masa, 

y también interactúan de manera 

cromatográfica con el soporte.

La movilidad está afectada por 

el voltaje aplicado y por el pH 

(el cual influye en la carga del 

analito.

Las proteínas no migran al pH 

de su punto isoeléctrico.

21.6 ELECTROFORESIS

 

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