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por las interacciones electrostáticas con las micelas cargadas. La MECC es adecuada para 

analizar compuestos neutros e insolubles en agua, como los esteroides.

ELECTROCROMATOGRAFÍA CAPILAR

Se pueden combinar las propiedades de la electroforesis capilar y la cromatografía de líqui-

dos de alta eficiencia para obtener una técnica híbrida que posea algunas de las mejores 

ventajas de cada una; esa técnica se llama electrocromatografía capilar (CEC), con la cual 

se separan moléculas neutras, como se hace en la HPLC. El capilar se llena con partículas 

de fase estacionaria para cromatografía de fase inversa, por ejemplo, partículas de sílice de 

1.5 a 3 

m con C

18

. No se desarrolla contrapresión en el bombeo electroosmótico, por lo 

que se pueden usar partículas muy finas. También se pueden usar columnas largas. Una fase 

móvil con disolvente polar es impulsada por el flujo electroosmótico, no por la presión. La 

solución amortiguadora acarreadora tiene, en general, 40 a 80% de disolvente orgánico, como 

acetonitrilo o metanol. La separación se basa en la distribución de los solutos entre la fase 

móvil y la fase estacionaria, como en HPLC. Pero el bombeo electroosmótico da como re-

sultado un perfil plano tipo tapón y no uno parabólico, lo que produce bandas angostas y 

altas eficiencias de separación. Se pueden inyectar volúmenes muy pequeños de muestra. Es 

típico que con electrocromatografía capilar se obtenga más o menos el doble del número de 

platos que en HPLC para partículas del mismo diámetro y la misma longitud. La combinación 

de partículas menores y columnas más largas en la electrocromatografía capilar hace posible 

tener columnas con 100 000 a 500 000 platos, en comparación con 25 000 en HPLC.

Ésta sí es una técnica verdaderamente cromatográfica. Encuentra aplicación en las 

separaciones de biomoléculas. Si bien con la electroforesis capilar de zona se pueden lograr 

grandes números de platos para esas moléculas, en especial si son grandes, las diferencias 

de la relación carga a masa se vuelven menores, haciendo difícil la resolución por electro-

foresis capilar de zona, y la electrocromatografía capilar ofrece ventajas en la separación.

ELECTROFORESIS CAPILAR EN GEL

Se trata de una electroforesis capilar análoga a la electroforesis convencional de zona en gel 

para separar macromoléculas de acuerdo con su tamaño. El capilar se llena con un gel poli-

mérico poroso, y se produce un cribado molecular cuando las moléculas se mueven a través 

del gel; es decir, la separación se basa tanto en la movilidad electroforética como en el tamaño 

molecular. Se alcanzan resoluciones muy altas. La tendencia es llenar el capilar con una 

matriz de gel líquido (soluciones de gel que se puedan bombear, como derivados de celulosa 

disueltos en la solución amortiguadora en la que se va a llevar a cabo la corrida). De este 

modo se puede sustituir el gel en el capilar para eliminar problemas de contaminación de la 

matriz de la muestra, lo cual se presenta en los geles fijos. Esta técnica se usa mucho para 

separar nucleótidos en la secuenciación del ácido desoxirribonucleico (ADN, capítulo 25).

La resolución en la electrocro-

matografía capilar es aproxima-

damente el doble de la de 

HPLC, debido al flujo electroos-

mótico en tapón.

Objetivos de aprendizaje

ALGUNOS DE LOS PUNTOS CLAVE QUE SE APRENDIERON

EN ESTE CAPÍTULO

● 

HPLC, p. 604

● 

Fases estacionarias, partículas, p. 606

● 

Componentes de los instrumentos, p. 609

● 

Desarrollo del método: selección de columna y disolvente, p. 613

● 

Cromatografía de líquidos rápida, p. 616

● 

Columnas delgadas, p. 616

OBJETIVOS DE APRENDIZAJE

 

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