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CAPÍTULO 22 

MÉTODOS CINÉTICOS DE ANÁLISIS

ecuatoriales, lo que permite que la molécula descanse plana sobre el sitio activo de la 

enzima y forme el complejo enzima-sustrato. La forma 

 no tiene el mismo arreglo de 

hidrógenos e hidroxilos y no puede descansar en forma totalmente plana sobre la enzima. 

Entonces, la conversión aeróbica de la glucosa (en general 36% 

 y 64% ) depende de 

la mutarrotación de la forma 

 a la forma . La mutarrotación (el equilibrio) desplaza a 

medida que se elimina la forma 

. Otra enzima, la mutarrotasa, afecta la mutarrotación, 

pero en general ésta no se necesita. Hay otra sustancia más, la 2-desoxi-d-glucosa, que es 

afectada por la glucosa oxidasa. La rapidez relativa de esta reacción es aproximadamente 

10% de la de 

-d-glucosa y por lo regular no ocurre en muestras de sangre que serán 

analizadas en busca de glucosa.

Hay miles de enzimas en la naturaleza, y la mayor parte presentan especificidad 

absoluta.

DETERMINACIÓN DE LAS ENZIMAS

Las enzimas mismas se pueden analizar midiendo la cantidad de sustrato transformado o 

de producto que generan en determinado tiempo. El sustrato debe encontrarse en exceso 

para que la rapidez de reacción sólo dependa de la concentración de la enzima; los resul-

tados se expresan en unidades internacionales de enzima. Por ejemplo, la actividad de una 

preparación de glucosa oxidasa se puede determinar midiendo en forma manométrica o 

amperométrica la cantidad de micromoles de oxígeno que se consumen por minuto. Por 

otra parte, el uso de enzimas para desarrollar procedimientos específicos para la determi-

nación de sustratos, en especial en química clínica, ha demostrado ser de extrema utilidad. 

En este caso, la concentración de la enzima es excesiva para que la rapidez de reacción 

dependa de la concentración del sustrato.

DETERMINACIÓN DE LOS SUSTRATOS DE ENZIMA

Para medir los sustratos de una enzima se pueden usar dos técnicas generales. La primera 

es la conversión completa del sustrato; en ella, se analiza un producto o se mide la des-

aparición de un reactivo que originalmente se encontraba en exceso antes y después de la 

eliminación de una sustancia catalizada enzimáticamente. La sustancia analizada (su cam-

bio neto) se relaciona entonces con la concentración original del sustrato. Con frecuencia 

estas reacciones no son estequiométricas con respecto a la concentración del sustrato debido 

a las posibles reacciones secundarias o la inestabilidad de los productos o reactivos; tam-

bién puede ser que la reacción necesite tiempos extraordinariamente largos para su termi-

nación. Por estas razones, se suele estandarizar el procedimiento analítico preparando una 

curva de calibración de algún tipo en la cual la cantidad medida se relaciona con concen-

traciones o cantidades conocidas del sustrato.

La segunda técnica para determinación de sustrato es medir la rapidez de una reacción 

enzimática, como la que se usa para determinar la actividad enzimática. Puede adoptar una 

de tres formas. En la primera se mide el tiempo requerido para que la reacción produzca 

una cantidad predeterminada de producto o para que se consuma una cantidad predeterminada 

de sustrato. En la segunda se mide la cantidad de producto formado o sustrato consumido 

en determinado tiempo (véase la determinación de glucosa en el experimento 35). Éstas son 

mediciones de un solo punto (llamadas mediciones de punto final) y requieren condiciones 

de reacción bien definidas; son fáciles de automatizar o de llevar a cabo manualmente. Un 

tercer procedimiento es la medición continua de la concentración de un producto o sustrato 

en función del tiempo para obtener la pendiente de la curva de rapidez de reacción, 

c/ t

son las llamadas mediciones de rapidez real. En general, las mediciones deben hacerse 

durante la primera parte de la reacción, donde la rapidez es de seudoprimer orden.

En general, los métodos de velocidad son más rápidos que los de punto final, o que 

los de las reacciones de conversión completa. Por otra parte, las reacciones de conversión 

completa son menos propensas de interferencias por inhibidores o activadores enzimáticos, 

Las actividades enzimáticas se 

miden por determinación de la 

rapidez de conversión del sus-

trato bajo condiciones de seudo-

orden cero.

La enzima no se consume, y

entonces sólo debe mantener-

se constante su concentración 

durante las mediciones de la

rapidez.

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