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CAPÍTULO 22 

MÉTODOS CINÉTICOS DE ANÁLISIS

se mide el aumento o disminución del color. Con frecuencia el cromógeno se acopla en-

zimáticamente al producto usando una segunda enzima.

1. Reacciones de la deshidrogenasa.  Las formas reducida (NADH) y oxidada (NAD



del dinucleótido de adenina y nicotinamida muestran marcadas diferencias en sus espec-

tros de absorción ultravioleta, por lo que se usan mucho para seguir el curso de las reac-

ciones de la deshidrogenasa. En la figura 22.4 se presentan los espectros de absorción 

ultravioleta del NAD



 y el NADH. El NAD tiene absorción despreciable a 340 nm, en 

tanto que el NADH tiene un máximo de absorción allí; por tal razón es sencillo entonces 

seguir el aumento o la disminución de concentración de NADH.

Un ejemplo del uso del NADH en las mediciones es la determinación de la enzima 

ácido láctico deshidrogenasa (LDH), importante para confirmar el infarto al miocardio 

(ataque al corazón). El NAD



 se requiere en la oxidación catalizada por LDH de ácido 

láctico a pirúvico:

 CH

3

 CH

3

 



 CHOH 

 NAD



 

LDH

É  C “O  NADH  H



 (22.17)

 



 CO

2

H CO

2

H

 

ácido láctico 

ácido pirúvico

La reacción es reversible y se puede emplear hacia cualquier dirección. Hacia la derecha, 

el suero que contiene una cantidad desconocida de LDH se agrega a una solución con 

concentraciones saturantes de la enzima de ácido láctico y NAD, y se mide el aumento de 

absorbancia a 340 nm en función del tiempo.

A veces se usa NADH para seguir reacciones enzimáticas en las que no participa 

directamente, pero se acopla en una reacción secundaria con el producto. Por ejemplo, la 

transaminasa glutámica oxalacética (GOT) sérica cataliza la reacción de 

-cetoglutarato y 

aspartato, y el producto se reduce con NADH en presencia de otra enzima, la deshidroge-

nasa de ácido málico (MDH):

 

-cetoglutarato  aspartato 

GOT

É  glutamanto 

 oxaloacetato 

(22.18a)

 oxaloacetato 

 NADH 

MDH

É  malato  NAD



 (22.18b)

La segunda reacción es rápida en comparación con la primera en presencia de un exceso 

de MDH, por lo que la rapidez de disminución de la concentración de NADH es directa-

mente proporcional a la actividad GOT.

2. Sustratos de determinación frecuente.  En la tabla 22.1 se muestra una lista de 

algunos sustratos determinados en la sangre o en la orina. Se describirán en ese orden en 

los párrafos siguientes.

0

260

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

1.2

Longitud de onda (nm)

Absorbancia

NAD

NAD

NADH

NADH

300

340

380

400

Figura 22.4. 

Espectros de absorción 

ultravioleta del NAD y el NADH. 

(Cortesía de Worthington Biochemi-

cal Corporation.)

Las reacciones con deshidroge-

nasa se siguen vigilando mi-

diendo la absorbancia UV del 

NADH.

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