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22.2 ENZIMAS 

CATALIZADORAS

 

655

Se siguen las reacciones de una 

oxidasa midiendo el consumo 

de O

2

 o la producción de H

2

O

2

.

Tabla 22.1

Ejemplos de reacciones enzimáticas de uso frecuente para determinar 

sustratos en química clínica

Sustrato

determinado Enzima 

Reacción

 

 

O

 

 



Urea Ureasa 

NH

2

¬

C ¬NH

2

 

 H

2

→ 2NH

3

 

 CO

2

Glucosa Glucosa 

 

C

6

H

12

O

6

 

 H

2

 O

2

 

→ C

6

H

12

O

7

 

 H

2

O

2

 

  oxidasa 

(glucosa) (ácido 

glucónico)

Ácido úrico 

Uricasa 

C

5

H

4

O

3

 

 2H

2

 O

2

 

→ C

4

H

6

O

3

N

4

 

 CO

2

 

 H

2

O

2

 

 

(ácido úrico) 

(alantoína)

Galactosa Galactosa 

 

d-Galactosa 

 O

2

 

→ d-galactohexodialdosa  H

2

O

2

 

  oxidasa

Alcohol en  

Alcohol 

Etanol 

 NAD



 

→ acetaldehído  NADH  H



  la sangre 

  deshidrogenasa

La ureasa fue la primera enzima que se aisló y cristalizó; ésta convierte cuantitati-

vamente la urea en amoniaco y dióxido de carbono. La cantidad de urea se calcula deter-

minando ya sea el amoniaco o el dióxido de carbono producidos. Se puede hacer de manera 

espectrofotométrica, haciendo reaccionar el amoniaco con un reactivo cromógeno.

Se suele determinar la glucosa midiendo el peróxido de hidrógeno producido por 

adición de glucosa oxidasa. La determinación es espectrofotométrica, acoplando el pe-

róxido de hidrógeno a medida que se produce con un reactivo como la o-toluidina. Este 

acoplamiento se efectúa en presencia de una segunda enzima, peroxidasa de rábano, que 

genera un producto con color. Las preparaciones comerciales de glucosa oxidasa suelen 

contener impurezas que reaccionan con peróxido de hidrógeno y consumen parte de éste, 

por lo que la conversión no es estequiométrica. Por ejemplo, una de las impurezas es la 

catalasa, específica para la descomposición del peróxido de hidrógeno. Sin embargo, la 

fracción del peróxido de hidrógeno convertida al producto colorido es constante, y se puede 

preparar una curva de calibración con diferentes concentraciones de glucosa.

Hay varios inhibidores posibles en la determinación de la glucosa; sin embargo, 

muchos de ellos actúan sobre la segunda reacción enzimática. El método de la glucosa 

oxidasa sería entonces más específico si se midiera el peróxido de hidrógeno directamente 

sin necesidad de una segunda enzima. Por ejemplo, si se agrega ion yoduro en presencia 

de un catalizador de molibdeno(VI), el yoduro se oxida rápidamente a yodo. La concen-

tración de yodo se puede seguir en forma amperométrica (capítulo 15). Como alternativa, 

se puede medir de manera amperométrica el consumo de oxígeno.

El ácido úrico suele determinarse midiendo su absorción ultravioleta a 292 nm. Sin 

embargo, la cantidad de ácido úrico en la sangre es pequeña, y la absorción no es especí-

fica. Así pues, luego de efectuar la medición, el ácido úrico se destruye agregando la enzima 

uricasa. Se vuelve a medir la absorbancia. La diferencia de absorbancias se debe al ácido 

úrico presente. Puesto que la uricasa sólo descompone el ácido úrico, el método es espe-

cífico. En un procedimiento parecido de determinación colorimétrica de ácido úrico, éste 

se oxida con molibdato para formar azul de molibdeno, un compuesto de molibdeno(V). 

En principio, se podría determinar ácido úrico como la glucosa, pero las impurezas en las 

preparaciones de uricasa suelen destruir rápidamente la ínfima cantidad de peróxido de 

hidrógeno producido.

La galactosa se determina en la misma forma que la glucosa, oxidando el cromógeno 

con H

2

O

2

 en presencia de peroxidasa. Se puede determinar alcohol en sangre midiendo 

con UV el NADH producido.

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