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24.4 INMUNOENSAYOS

 

687

de antígeno no marcado (Ag), los sitios de unión limitados en el anticuerpo se van saturan-

do de manera progresiva, y el anticuerpo puede unirse cada vez menos al antígeno radio-

marcado. Después de la incubación se separan los antígenos enlazados de los antígenos no 

enlazados (libres) y se mide la porción marcada (con radiactividad, fluorescencia, etc.) de 

alguna o ambas fases para determinar el porcentaje de unión del antígeno marcado.

La solución del anticuerpo es diluida inicialmente para que, en ausencia de antígeno 

estándar no marcado o desconocido, se enlace 50% de la dosis con trazador de Ag*. Un 

menor enlace de antígeno marcado cuando se agrega la muestra indica la presencia de 

antígeno no marcado. Se prepara una curva de calibración usando soluciones estándar 

de antígeno de concentración conocida graficando el porcentaje de antígeno marcado que 

se enlazó, o bien la relación de porcentaje de enlazado a libre (B/F, bound/free) en función 

de la concentración de antígeno sin marcar. Con esta curva se puede determinar la con-

centración desconocida del antígeno.

En la figura 24.6 se muestra un ejemplo de una curva de calibración. Obsérvese el 

amplio intervalo de concentraciones (10

−2

 a 10

3

 ng/mL en la región más lineal) y la gran sen-

sibilidad. La pendiente de la curva de calibración, y en consecuencia el intervalo y la 

sensibilidad, dependen de la dilución inicial del anticuerpo. La sensibilidad es máxima con 

altas diluciones del anticuerpo, pero con un anticuerpo más concentrado se cubre un in-

tervalo más amplio de concentraciones del antígeno. También, como se dijo antes, para 

obtener una sensibilidad muy alta se aconseja usar una dilución del antisuero que se enlace 

con casi 50% del antígeno marcado (usando una cantidad muy pequeña) en ausencia del 

antígeno no marcado. Esto se debe a que una disminución de 50% de la relación unido/li-

bre (B/F) con un valor inicial de 1.0 (es decir, 50% unido inicialmente) se puede determi-

nar con más exactitud que una disminución similar de porcentaje desde un valor inicial, 

por ejemplo, de 10 (91% enlazado). En el primer caso habría una disminución de 50% 

enlazado (B/F 

⫽ 1.0) a 33% enlazado (B/F ⫽ 0.5), en tanto que en el segundo caso la 

disminución sería de 91% (B/F 

⫽ 10) a 83% (B/F ⫽ 5). La sensibilidad de la parte inicial 

de la curva puede aumentarse usando cantidades mínimas de antígeno marcado.

Incubación

Ac

(anticuerpo)

Ag*

(antígeno

radiomarcado)

Ag

(antígeno en

la muestra o

en el estándar)

Separación

Ag*–Ab

y

Ag–Ab

(enlazados)

Ag* y Ag

(libre)

Ag*–Ab

y

Ag–Ab

(enla-

zados)

+

Ag*–Ag

(libre)

Figura 24.5. 

Principios del 

radioinmunoensayo.

−3

Valor para el paciente

Porcentaje enlazado

50

40

30

20

10

0

−2

−1

0

1

Conc log (ng/mL)

2

3

4

5

Figura 24.6. 

Ejemplo de 

curva de calibración para in-

munoensayo.

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