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CAPÍTULO 24 

QUÍMICA CLÍNICA

El principio competitivo de los inmunoensayos se puede aplicar a otros sistemas. 

Toda sustancia que pueda unirse en forma específica a una macromolécula se puede cuan-

tificar aplicando el principio de unión competitiva de proteína. La macromolécula espe-

cífica que se enlace puede ser una proteína de suero, como la globulina que se une a la 

tiroxina, un receptor específico o un anticuerpo.

ESPECIFICIDAD DE LOS INMUNOENSAYOS

Ningún antisuero de los que se usan en los inmunoensayos es totalmente específico hacia 

determinado antígeno. La especificidad está influida por: a) la heterogeneidad del anti-

cuerpo,  b) la reacción cruzada con otros antígenos y c) las posibles interferencias de la 

reacción antígeno-anticuerpo debidas a sustancias de bajo peso molecular que puedan al-

terar el ambiente de la reacción. Determinado antígeno induce la formación de múltiples 

anticuerpos. Éste se puede combinar con los diversos anticuerpos en distintos grados, los 

cuales dependen de las constantes respectivas de equilibrio. Además, un solo tipo de anti-

cuerpo puede tener una cantidad y ubicación variable de sitios de unión. El problema de 

la heterogeneidad se ha paliado con el desarrollo de mejores técnicas de purificación 

de antisueros. Además, la producción sintética de anticuerpos monoclonales, es decir, 

anticuerpos sencillos, permite tener gran especificidad.

El problema de reacción cruzada con otros antígenos es complejo y debe considerarse 

por separado para cada tipo de antígeno que se mide. Se podrán necesitar técnicas espe-

ciales de purificación.

Entre los factores no específicos que pueden modificar la rapidez de la reacción 

antígeno-anticuerpo están pH, fuerza iónica, altas temperaturas, composición de la solución 

amortiguadora para el medio de incubación, heparina, urea y altas concentraciones de 

bilirrubina. Los estándares de antígeno y las muestras problema deben prepararse (diluirse) 

en un plasma libre de antígenos para eliminar las diferencias de composición. Se debe usar 

el mismo amortiguador u otro diluyente. Si no se dispone de plasma libre de antígenos de 

la misma especie, se puede usar plasma de una especie que no tenga reacción cruzada.

PREPARACIÓN DEL ANTICUERPO

Por supuesto, se requiere un antisuero adecuado para el inmunoensayo. La concentración 

del anticuerpo (llamada título) es importante, pero el criterio principal para establecer un 

antisuero adecuado es su especificidad y afinidad para el antígeno que se determina.

El método general para inducir la formación de anticuerpos es inyectar de 0.2 a 2 mg 

del antígeno puro mezclado con el “auxiliar de Freund”, que es una mezcla de aceite mineral, 

ceras y bacilos muertos, que aumenta y prolonga la respuesta del antígeno. Entre los anima-

les que se usan están conejos, ovejas, cobayos (“cuyos”), cabras, pollos o monos, dependiendo 

del volumen de antisuero que se desea y del grado de actividad extraña del antígeno.

Las moléculas que son demasiado pequeñas para inducir la formación de anticuerpos 

(pesos fórmula de 1 000 a 5 000, llamados haptenos en oposición a los antígenos, como 

los polipéptidos menores o los esteroides) se unen a acarreadores como proteínas o com-

puestos sintéticos antes de que sean inyectados. Entre los acarreadores comunes están la 

globulina gamma y la albúmina humana, péptidos sinéticos y polímeros.

Una vez inmunizado un animal, puede ser inyectado varias veces para obtener dife-

rentes lotes de antisueros. Los antisueros son productos comerciales para la mayoría de 

los ensayos para los cuales los antígenos marcados están disponibles. Los antisueros di-

luidos se pueden guardar durante largo tiempo cuando se encuentran congelados. Una vez 

descongelados, se deben guardar a 4

⬚C.

PERIODO DE INCUBACIÓN PARA EL ANÁLISIS

El tiempo necesario para llegar al equilibrio en la reacción antígeno-anticuerpo durante el 

análisis varía de algunas horas a varios días, dependiendo del antígeno específico que se esté 

No es igual que el título des-

crito en el capítulo 5.

Los analitos de hapteno deben 

unirse a moléculas mayores para 

inducir la formación de anti-

cuerpos.

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