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CAPÍTULO 24 

QUÍMICA CLÍNICA

Estos ensayos se practican en forma conveniente inmovilizando el antígeno o anticuerpo 

sobre una superficie sólida, como vidrio o partículas de plástico. Se evita la centrifugación 

adsorbiendo en tubos o discos de polipropileno o poliestireno. Éstos se lavan con facilidad 

y adsorben una cantidad reproducible de anticuerpo o antígeno. Se suelen usar pequeños 

pozos de plástico troquelados en una hoja (por ejemplo, 96 pozos) para procesar muchas 

muestras y estándares al mismo tiempo. Hay pipeteadores y medidores automáticos que 

se usan con ellas.

Si un marcador enzimático se une al anticuerpo, éste es inhibido al reaccionar con 

el antígeno del analito; en este caso se trata de un ensayo de unión no competitiva de 

proteína (véase por ejemplo la referencia 11). En ELISA de unión competitiva, el anti-

cuerpo del antígeno analito es adsorbido en la fase sólida mediante interacciones hidrofó-

bicas. Entonces se agrega una cantidad conocida de antígeno marcado con enzima junto 

con la muestra que contiene antígeno no marcado. Siguiendo la incubación, los pozos se 

lavan y se adiciona el sustrato de la enzima para producir por lo regular un producto co-

lorido vía una reacción catalizada por enzima. Se produce una coloración máxima (máxima 

reacción enzimática) si no hay antígeno en la muestra que compita por la unión con el 

antígeno marcado, y esto disminuye en proporción a la cantidad de antígeno en la muestra. 

En esta técnica se requieren cantidades relativamente grandes de antígeno purificado, para 

que el marcado sea uniforme.

Los  ensayos sándwich son no competitivos, dado lo cual la muestra se adiciona a 

los pozos que contienen al anticuerpo adsorbido, seguido (después de la incubación) por 

la adición de un anticuerpo marcado con enzima, el cual se une en proporción a la canti-

dad de antígeno unido. El anticuerpo no combinado y marcado se separa por lavado, y 

entonces la fase sólida contiene el antígeno sándwich entre anticuerpos no marcado y mar-

cado. Entonces, el color que produce la reacción enzimática es directamente proporcional 

a la cantidad de antígeno.

En la prueba ELISA indirecta, el antígeno de la muestra se adsorbe primero en la 

fase sólida, sea en forma directa o a través de un anticuerpo, como se mencionó antes. El 

anticuerpo primario no marcado se adiciona, se incuba y se lava. Por último se agrega un 

anticuerpo secundario marcado (que surge contra la clase de inmunoglobulina de la espe-

cie de la cual se originó el anticuerpo primario), se incuba y se lava. También aquí la 

actividad enzimática (intensidad del color producido) es proporcional a la cantidad de 

antígeno. La ventaja de este método es que se puede usar un anticuerpo “universal” con-

jugado como el anticuerpo secundario contra todos los anticuerpos primarios usados de la 

misma clase de inmunoglobulina de la especie apropiada. Entonces no se requieren anti-

Figura 24.7. 

Ensayos de 

ELISA. Ag es el antígeno 

analito.

En la unión competitiva, el antí-

geno analito y el antígeno mar-

cado compiten para ocupar 

sitios en el anticuerpo adsor-

bido.

En los ensayos sándwich, el an-

tígeno analito se une al anti-

cuerpo adsorbido y después el 

anticuerpo marcado se une al 

antígeno marcado.

En la prueba ELISA indirecta se 

usa un anticuerpo universal mar-

cado.

Ac ¬ E

Ag

Ag ¬ Ac ¬ E

Inmunoensayo enzimático con unión no competitiva. E se inhibe al combinarse.

¬

Ac

Ag ¬ E

¬

Ac ¬ Ag

Ag

¬

Ac ¬AgE

ELISA competitiva. La cantidad de uniones Ag¬E decrece conforme aumenta Ag.

¬

Ac

Ag

¬

Ac ¬ Ag

¬

Ac¬Ag

Ac¬E

¬

Ac¬Ag¬Ac¬E

ELISA no competitiva en sándwich. La unión AcE aumenta en proporción

de la cantidad de Ag.

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M

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