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constituye menos de la mitad de los 80 000 a 100 000 genes que se habían pronosticado. 

La mayor parte del genoma consiste en largos trechos de regiones no codificantes altamente 

repetitivas de ADN, y aproximadamente la cuarta parte del genoma es como un desierto 

que contiene largos segmentos libres de genes. Esta complejidad ha sido uno de los desa-

fíos en la búsqueda de los genes.

25.4  ¿Cómo se secuencian los genes?

La secuenciación genética es un proceso complicado, pero hoy es bastante sistemático. 

Las figuras 25.7 y 25.8 resumen los pasos implicados, que se describirán adelante. Se 

secuencian fragmentos traslapados de genes, y a partir de las porciones que se traslapan 

se puede deducir el gen entero. El proceso consiste primero en aislar y multiplicar (clonar) 

grandes segmentos de los genes para obtener material suficiente para trabajar. Esos seg-

mentos clonados forman una biblioteca genómica y se suministran a los laboratorios se-

cuenciadores. Los segmentos largos que se traslapan se descomponen en tramos más cor-

tos usando una técnica de cizallamiento aleatorio en la que se hace pasar la muestra por 

una aguja, donde las fuerzas de cizalla la rompen. Originalmente se empalmaban usando 

una enzima nucleasa, pero la técnica de cizalla da más aleatoriedad. (Las nucleasas degra-

dan los ácidos nucleicos. Éstas pueden actuar sobre hebras individuales, sobre hebras 

dobles o sobre ambas. Una nucleasa puede degradar desde un extremo —una exonu-

cleasa— o comenzar en la parte media —una endonucleasa.) Los empalmes se replican 

por apareamiento con los nucleótidos complementarios apropiados. Se comienza en un 

extremo y se agrega un nucleótido tras otro. De ordinario se avanzaría así hasta haber 

replicado todo el fragmento, pero se cuenta con una forma de detener aleatoriamente la 

replicación en diferentes puntos a lo largo del ADN, para cada uno de los cuatro nucleó-

tidos. También se cuenta con una forma de determinar cuál es el nucleótido terminal, si es 

A, C, G o T. Si, entre los millones o miles de millones de clones de fragmentos, se obtie-

nen algunos de todas las longitudes posibles a lo largo de la secuencia de nucleótidos, y 

si se pueden separar por su longitud y alinearlos, se tendrá el conjunto completo y ordenado 

de nucleótidos en la plantilla original del ADN. Supóngase que se ha aislado una serie de 

hebras, por orden de longitud, y que cada una termina en un nucleótido:

                            T

                                          A

                                                       A

                                                                     C

                                                                                   G

Entonces la plantilla original era TAACG. A continuación se describirá cómo se hace.

25.5  Replicación del ADN: la reacción en cadena de la polimerasa

El ADN tiene una propiedad única: se desnaturaliza por calentamiento (en forma muy 

parecida a las proteínas), aunque esto ocurre por la separación de las dos hebras. Esto 

Antes o después de leer las si-

guientes secciones sobre secuen-

ciación, consultar www.pbs.

org/wgbh/nova/genome/

sequener.html así como

Sequence for Yourself.

Genoma

Biblioteca

genómica

Nucleasa

Fragmentos grandes

de ADN

de 100 a 300 kb

Inserción en

el vector BAC

Replicación

bacteriana

Figura 25.7. 

Creación de una biblioteca genómica.

25.5  REPLICACIÓN DEL ADN: LA REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA

 

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