Página principal



Quimica Analitica

Descargar 11.33 Mb.
Ver original pdf

Quimica Analitica





Descargar 11.33 Mb.
Ver original pdf
Página693/818
Fecha de conversión31.08.2018
Tamaño11.33 Mb.
1   ...   689   690   691   692   693   694   695   696   ...   818

700

 

CAPÍTULO 25 

EL SIGLO DEL GEN

25.7 Secuenciación de ADN

Con lo anterior ya se tienen diferentes segmentos del genoma listos para secuenciar. Estos 

fragmentos son de distintas longitudes y se traslaparán. Para armar el rompecabezas se 

secuenciará cada uno; después se alinearán para ver dónde están los traslapos y ¡listo!: 

se conocerá el genoma para todos los 23 pares de cromosomas (se ha simplificado un poco, 

debido a la estructura variada del genoma).

El proceso real de secuenciación es muy parecido al proceso PCR. Se pasa a través 

de la desnaturalización e hibridación para replicar las fracciones de ADN. La replicación 

o hibridación se hace en presencia de la plantilla de ADN, una polimerasa Taq y un ceba-

dor, para iniciar la replicación. Se debe hacer notar que, con frecuencia, la secuenciación 

precisa comienza a unas 50 bases del cebador. (La selección de un cebador es importante 

para colocarlo en un lugar adecuado en las plantillas de ADN, pero no se explicarán los 

detalles. Se debe poner un cebador a una distancia máxima del extremo 3

⬘, porque se 

extiende en esa dirección.)

Hay una diferencia importante entre esto y la técnica de PCR convencional. Además 

de agregar los cuatro nucleótidos para construir la hebra complementaria, también se adi-

ciona un pequeño porcentaje, cerca de 5%, de isómeros de cada nucleótido en los que el 

grupo 3

⬘-hidroxi en el azúcar se reemplaza con un hidrógeno; éstos son los llamados di-

desoxinucleótidos. Considérese sólo el nucleótido A. La mayor parte del tiempo, cuando 

la polimerasa ve a una T, presentará la A complementaria y el proceso de hibridación 

continuará. Pero 5% de las veces se presentará el didesoxi-A. La polimerasa es incapaz de 

hacer crecer la hebra a partir de un didesoxinucleótido, y el alargamiento culminará, si-

tuación que se presenta también con los demás nucleótidos. Cuando se tienen miles de 

millones de copias de la plantilla de ADN, es seguro que se terminará una fracción de ellas 

con todas las longitudes posibles, cada una terminando en una molécula de didesoxi A, C, 

G o T. Habrá millones de cada una; se separarán por electroforesis y se medirán (véase 

más adelante). En este punto se debe mencionar una propiedad importante de los dides-

oxinucleótidos: están marcados químicamente, por lo regular con un fluoróforo que permite 

verlos a medida que son eluidos en un aparato de electroforesis. Cada uno tiene un mar-

cador diferente, que fluoresce a distinta longitud de onda; entonces, a través de los cuatro 

colores fluorescentes diversos se conocerá en qué nucleótido termina el fragmento de 

ADN.

Si sólo se considera la marca A, las piezas separadas se podrían ver como las si-

guientes sobre el gel:

e introdujo ciertos marcadores de mapeo en la década de 1980 que fueron funda-

mentales para iniciar la secuenciación del gen humano. Otra pieza crítica fue el 

desarrollo de poderosos programas informáticos para clasificar los miles de millones 

de bits de información. El Dr. Phillip Green, colega de Olson, creó dos programas 

informáticos, llamados Phred y Phrap, que han desempeñado papeles críticos en el 

análisis de datos primigenios de ADN.

CTTAGCAGGAAT

A

CTTAGCAGGA

A

CTTAGCAGG

A

CTTAGC

A

El crecimiento de la cadena 

concluye con la adición de un 

didesoxinucleótido.

25Christian(693-711).indd   700

25Christian(693-711).indd   700

9/12/08   16:03:47

9/12/08   16:03:47



1   ...   689   690   691   692   693   694   695   696   ...   818

Similar:

Quimica Analitica iconAplicación de Microsoft Excel a Química Analítica: validación de métodos analíticos
En estadística, se define población como el conjunto de individuos portadores de
Quimica Analitica iconQuímica Analítica
En el año 2002 se actualizaron los contenidos temáticos de las asignaturas que componen las licenciaturas de Ingeniería de los
Quimica Analitica iconQuímica // º bachillerato. Formulación y nomenclatura química inorganica. Tema temario química. Fernando Escudero Ramos

Quimica Analitica iconEvo morales ayma presidente constitucional del estado plurinacional de bolivia
Evaluación de Impacto Ambiental – eia, que deberá ser realizada de acuerdo a los siguientes niveles: Requiere de eia analítica integral;...
Quimica Analitica iconFormulario de geometria analitica pdf
...
Quimica Analitica iconFormulacion de quimica organica
La Química Orgánica constituye una de las principales ramas de la Química, debido al gran número de compuestos que estudia, los cuales...
Quimica Analitica iconDep. FÍSica y química I. E. S. “Juan de aréjula”
Química orgánica, impartidas por el Departamento de Física y Química del ies “Juan
Quimica Analitica iconFormulación y nomenclatura de química inorgánica
Este lenguaje constituye la nomencla­tura química. Se completa con una forma abreviada de escribir dichos nombres, que nos informa,...


Descargar 11.33 Mb.
Ver original pdf