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Quimica Analitica

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EXPERIMENTOS

2.  Preparados.

a)  

Solución stock estándar de fósforo (100 mg de P mg/dl).  Disuelva 0.439 g 

de KH

2

PO

4

 en agua y diluya a 100 mL en un matraz aforado.

b)  

Estándares de trabajo de fósforo.  Adicione con una pipeta 1 mL de la solución 

stock a un matraz aforado de 100 mL y diluya hasta la marca con ácido triclo-

roacético (TCA) al 5%. (PRECAUCIÓN: El ácido tricloroacético es muy co-

rrosivo. Evite su contacto con la piel. Nunca debe pipetearse con la boca.) Éste 

contiene 1 mg/dl de fósforo, y se usará para preparar la serie de estándares. Con 

una pipeta transfiera 2 y 5 mL de esta solución a matraces aforados de 10 mL 

y diluya hasta la marca con ácido tricloroacético al 10%. De esta manera posee 

ahora estándares de 0.2, 0.5 y 1 mg/dL de P, los cuales corresponden a concen-

traciones de 2, 5 y 10 mg/dL de suero, respectivamente, en el procedimiento 

que se describe adelante, puesto que la muestra se diluyó 1:10.

c)   Solución de molibdato de amonio.  Disuelva 0.62 g de molibdato de amonio, 

(NH

4

)

6

Mo

7

O

24

 

 4H

2

O, en 2.0 mL de agua y agregue 8 mL de H

2

SO

4

 5 M. La 

solución debe ser estable indefinidamente. Deséchela si los blancos tienen un 

color azul.

Procedimiento

1.  Suero.  Haga el análisis por duplicado. Coloque 9.50 mL de ácido tricloroacético al 

5% en un tubo de centrífuga de 12 mL. Agregue 0.500 mL de suero, mezcle bien y 

deje reposar durante 5 min. Centrifugue a 1 500 rpm hasta que el sobrenadante sea 

transparente (unos 5 min). Si no se dispone de una centrífuga, la muestra debe filtrarse 

a través de papel filtro Whatman núm. 42 seco y recibirse en un vaso seco. Como el 

papel filtro puede contener impurezas reductoras, el testigo debe prepararse usando 

ácido tricloroacético al 5% filtrado.

 

 

Transfiera 5.00 mL del sobrenadante claro a un tubo de ensayo de 15 

 50 mm. 

Prepare un blanco y los estándares pipeteando 5.00 mL de ácido tricloroacético al 

5% y de las soluciones estándar de 0.2, 0.5 y 1.0 mg/dL de P en cuatro tubos de ensayo 

separados. A todos los tubos de ensayo agregue 1.00 mL del reactivo de molibdato y 

mezcle bien. Por último, agregue 0.40 mL del reactivo de ácido aminonaftolsulfónico 

y mezcle bien. Deje reposar durante 5 a 10 min o más, y mida la absorbancia para 

cada solución en una celda a 690 nm ajustando la absorbancia a cero con agua 

destilada. Reste cualquier lectura del blanco de todas las lecturas de los estándares 

y de la muestra.

 

 

Trace la gráfica de la absorbancia neta de los estándares en función de la con-

centración usando una hoja de cálculo (capítulos 3 y 16). Con esta gráfica y la 

absorbancia neta de la muestra, determine la concentración de fósforo en el filtrado 

libre de proteína. Multiplique por 20 para obtener la concentración en la muestra 

original de suero. El intervalo normal de fósforo en suero es de 3.0 a 4.5 mg/dL 

aproximadamente para los adultos, y de 4.5 a 6.5 mg/dL para los niños.

EXPERIMENTO 25  DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA

DE MANGANESO Y CROMO EN UNA MEZCLA

Principio

Se pueden determinar simultáneamente las concentraciones de manganeso y cromo mi-

diendo la absorbancia de la luz a dos longitudes de onda después de haber oxidado los 

metales a Cr

2

O

7

2−

 y a MnO

4

. Se ha demostrado que la ley de Beer se cumple con mucha 

aproximación si las soluciones contienen H

2

SO

4

 cuando menos 0.5 M. El Cr

2

O

7

2−

 tiene un 

máximo de absorción a 440 nm, y el MnO

4

 lo tiene a 545 nm (hay un máximo algo más 

intenso a 525 nm, pero a 545 nm hay menor interferencia del Cr

2

O

7

2−

). Se resuelven ecua-

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