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EXPERIMENTOS

Cromatografía

EXPERIMENTO 31  SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA

DE AMINOÁCIDOS EN CAPA DELGADA

Principio

Los aminoácidos se separan en una placa cromatográfica de capa delgada, por ejemplo de 

gel de sílice, mediante una selección de dos disolventes para su elución. El reactivo que 

se usa como revelador es ninhidrina.

Soluciones y reactivos necesarios

Suministrados

a)   Eluyente. Núm. 1: alcohol butílico-ácido acético-agua (80:20:20, vol/vol); 

núm. 2: alcohol propílico-agua (7:3, vol/vol).

b)  

Revelador. Solución de ninhidrina: ninhidrina 3% (1,2,3-tricetohidrindeno, 

Eastman núm. 2495) al 0.3% en alcohol butílico que contenga 3% de ácido 

acético glacial.

Equipo de cromatografía

Hoja Fischer Scientific TLC Kit A u hojas equivalentes para cromatografía en capa delgada, 

aspersor (para aplicar el reactivo), cámara de desarrollo (como el Fischer Scientific TLC 

Kit A: www.fisheredu.com o equivalente).

Procedimiento

Obtenga su mezcla problema. Las mezclas a separar contendrán aproximadamente 1 mg 

de cada aminoácido por mililitro de solución alcohólica 0.5 M en ácido clorhídrico (véase 

la descripción más adelante). Deposite aproximadamente 1 

l de la solución de la muestra 

en la placa cromatográfica, a unos 2 cm del borde inferior (no es necesario activar la lámina 

para esta separación). El problema debe contener ácidos cuyos valores de R

f

 sean lo sufi-

cientemente distintos en el sistema de disolventes utilizados como para ser separados fá-

cilmente. El profesor le asesorará en cuanto a qué soluciones estándar de aminoácidos 

podrá correr con su problema para distinguir entre dos aminoácidos que pudieran tener un 

valor de R

f

 cercano a uno de su mezcla. Deje secar 15 a 20 min para asegurar la evapora-

ción completa del ácido clorhídrico.

Corra la placa de su cromatograma en el disolvente seleccionado para una distancia 

aproximada de 10 cm o durante unos 90 min (véase la lista de valores de R

f

 en la tabla de 

la página 781 y siga las instrucciones del profesor para seleccionar el disolvente adecuado 

para su mezcla problema). Seque la lámina con el cromatograma desarrollado y rocíela 

con la solución de ninhidrina. Caliente suavemente durante varios minutos, hasta que 

aparezcan claramente visibles las zonas separadas.

Resultados

La tabla referida muestra los valores de R

f

 aproximados obtenidos cuando los dos sistemas 

de disolventes se utilizan para la separación de 13 aminoácidos diferentes. De esta tabla y de 

los ácidos estándar que corra, determine qué aminoácidos están presentes en su problema.

Comentario

Debido a la limitada solubilidad de diversos aminoácidos, se debe tener mucho cuidado en 

la preparación de la muestra antes de aplicar la cromatografía. En el procedimiento se sugiere 

el uso de HCl 0.5 M alcohólica. Sin embargo, quizá se requiera añadir cantidades suficien-

tes de agua para lograr la solubilidad. Cuando éste sea el caso, es de gran importancia 

mantener un pequeño punto de aplicación y permitir suficiente tiempo para completar la 

evaporación de los solventes del punto de aplicación antes de iniciar el desarrollo.

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