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Cuando se requiere un mayor grado de resolución es posible mejorar los resultados 

haciendo uso de la técnica de elución en dos dimensiones. El punto de aplicación que 

contiene los componentes por separar se coloca en la esquina inferior izquierda de una 

placa de 20 

 20 cm, a 2 cm de cada orilla. La lámina se eluye en la forma normal, se 

retira y se seca. A continuación se gira 90

 en contra del sentido en el que giran las ma-

necillas del reloj y se corre otra vez en un sistema diferente de disolventes para separar 

componentes que no se resolvieron en la primera migración.

Los valores R

f

 de los aminoácidos separados dependen de varios factores, como las 

concentraciones de aminoácidos y otros componentes en la mezcla problema. Por esta razón 

los estándares que se usan deben ser lo más parecidos posible a las muestras reales.

El revelado con ninhidrina tiene límites de detección que pueden variar de 0.01 a 0.5 

g, dependiendo de los aminoácidos en particular y del método de separación empleado. 

Se puede lograr cierto grado de estabilización del color de la ninhidrina rociando la placa 

cromatográfica con la siguiente solución: 1 mL de solución acuosa saturada de nitrato de 

cobre disuelto en 0.2 mL de ácido nítrico al 10% en 100 mL de etanol (al 95%). A conti-

nuación la placa se expone a vapores de amoniaco y se obtiene un complejo rojo de cobre. 

El color es estable sólo en ausencia de ácidos.

 Valor 

de R

f

 aproximado, Valor 

de R

f

 aproximado

 

disolvente de elución 

disolvente de elución

Aminoácido núm. 

núm. 

2

Alanina 0.29 

0.50

Arginina (monoclorhidrato) 

0.15 

0.15

Asparagina 0.20 

0.43

Cistina 0.12 

0.22

Ácido glutámico 

0.33 

0.40

Glicina 0.22 

0.39

Leucina 0.57 

0.69

Lisina 0.10 

0.20

Metionina 0.47 

0.63

Serina 0.25 

0.45

Triptófano 0.55 

0.71

Tirosina 0.52 

0.69

Valina 0.40 

0.60

EXPERIMENTO 32  ANÁLISIS DE UNA MEZCLA TERCIARIA

CON CROMATOGRAFÍA DE GASES

Principio

Se separa una mezcla de pentano, hexano y heptano por cromatografía de gases. Se pueden 

usar varios tipos distintos de columna y se obtendrán resultados satisfactorios si se usa un 

detector simple de conductividad térmica o de alambre caliente. Se calibra la respuesta del 

instrumento para cada compuesto corriendo el análisis de una mezcla estándar de los 

compuestos. El orden de separación se determina corriendo los compuestos individuales.

Un experimento alternativo es analizar una mezcla de dos componentes, por ejemplo 

n-hexano y n-heptano, y usar n-pentano como estándar interno.*

Soluciones y reactivos requeridos

1.  Suministrados. Acetona

2.  Preparados.  Mezcla estándar. Prepare la siguiente mezcla estándar: n-pentano (5.00 

mL), n-hexano (10.0 mL) y n-heptano (15.00 mL). Todas las mezclas deben prepa-

N. del R. T. La “n” para indicar la linealidad de una molécula hidrocarbonada en realidad no se necesita. Véase 

R. B. Fox, W. H. Powell. Nomenclature of organic compounds, principles and practice. Oxford University Press y 

American Chemical Society. E. U. A., 2001, capítulo 2.

CROMATOGRAFÍA

 

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