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Por comparación de los tiempos de retención, identifique los componentes de 

cada analgésico. Mida las áreas de los picos de aspirina y con la curva de calibración 

calcule e informe las concentraciones en las diversas tabletas. Si hay algún traslapo 

del pico de la aspirina con otro, extrapole a la línea de base y mida el área desde la 

línea de base. Si corrió dos cromatogramas, señale la concentración promedio.

Análisis cinético

EXPERIMENTO 35  DETERMINACIÓN ENZIMÁTICA

DE GLUCOSA EN SANGRE

30

Principios

Se prepara un filtrado libre de proteínas obtenido con una muestra de 0.5 mL de sangre 

entera, suero o plasma precipitando las proteínas con hidróxido de zinc. La glucosa en una 

alícuota de ese filtrado se hace reaccionar con una mezcla de las enzimas glucosa oxidasa 

y peroxidasa de rábano picante, y el peróxido de hidrógeno producido se acopla con o-

dianisidina, un donador cromogénico de hidrógeno, con objeto de que se genere una co-

loración cuyo máximo de absorción está en 540 nm.

Ecuaciones

 glucosa 

 O

2

 

 H

2

glucosa oxidasa

⎯ ⎯ ⎯→  ácido glucónico  H

2

O

2

 

H

2

O

2

 

o-dianisidina 

glucosa oxidasa

⎯ ⎯ ⎯ ⎯ ⎯ ⎯ ⎯→

peroxidasa del rábano pícante

 cromógeno (máx. absorción a 540 nm)

Soluciones y reactivos necesarios

31

1.  Suministrados.

a)  

Solución de sulfato de zinc al 2.2% (a partir de ZnSO

4

 

ⴢ 7H

2

O); H

2

SO

4

 3 

M.

b)   Solución saturada de hidróxido de bario.  Agregue unos 80 g de Ba(OH)

2

 

8H

2

O a 1 L de agua hirviendo. Interrumpa el calentamiento, coloque un tapón 

con una trampa de cal sodada, mezcle muy bien y deje reposar durante varios días 

para que se sedimente. A 25

C, la solución será aproximadamente 0.22 M.

c)   Solución de hidróxido de bario 0.06 M.  Diluya 270 mL de la solución sa-

turada de hidróxido de bario a 1 L con agua libre de CO

2

 (hervida y enfriada). 

De esta solución se necesitará un volumen de 9.00 

± 0.10 mL para neutralizar 

10.00 mL de la solución de sulfato de zinc. Haga la prueba agregando 10.00 

mL de sulfato de zinc y 25 mL de agua a un matraz Erlenmeyer de 100 mL, 

agregue dos gotas de solución de fenolftaleína al 0.2% en alcohol y titule con 

la solución de hidróxido de bario hasta llegar a un color rosa débil pero per-

manente. Diluya una de las dos soluciones hasta la equivalencia adecuada.

2.  Preparados.

a)   Solución amortiguadora de glicerina, pH 7.0.  Disuelva 0.35 g de Na

2

HPO

4

 

y 0.21 g de KH

2

PO

4

 en 60 mL de agua y agregue 40 mL de glicerina grado 

reactivo.

b)   Reactivo de enzima.  Muela 250 mg de glucosa oxidasa, 5 mg de peroxidasa 

de rábano picante y 1 mL de la solución amortiguadora con glicerina, en un 

mortero limpio y seco. Páselos a una probeta graduada de 100 mL lavando 

con la solución amortiguadora con glicerina y afore a 100 mL con esta misma 

solución. Filtre recibiendo en un matraz limpio y seco. La filtración se facilita 

si se usa un embudo Büchner con una ligera succión.

30

 Vea la nota 32 al pie, en la siguiente página, acerca de los problemas acuosos.

31

 Hay reactivos disponibles en el comercio, lo cual elimina gran parte de la preparación de soluciones.

ANÁLISIS CINÉTICO

 

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