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EXPERIMENTOS

Disuelva 10 mg de o-dianisidina en 1.0 mL de metanol absoluto agitando 

en forma intermitente. Vierta en una botella ámbar y agregue la solución en-

zimática filtrada. Vierta rápidamente la porción inicial para evitar la precipi-

tación del cromógeno. Este reactivo es estable durante tres semanas, cuando 

se guarda en refrigeración.

c)  

Estándares de glucosa.  Prepare una solución stock al 1% disolviendo 1 g 

(pesado con exactitud) de glucosa grado reactivo secada en la estufa (a 110

C 

durante 1 h) en agua, y diluyéndola con una solución de ácido benzoico al 

0.25% en un matraz aforado. El ácido benzoico funciona como preservativo.

Prepare estándares de trabajo que contengan 100, 200, 300 y 400 mg de 

glucosa por 100 mL diluyendo la solución stock con ácido benzoico a 0.25% 

(esto es, 5.0, 10.0, 15.0 y 20.0 mL diluidos a 50 mL).

Antes del experimento

Seque la glucosa a 100

C durante 1 h y enfríela en un desecador.

Procedimiento

Con una pipeta agregue 0.5 mL de la muestra de sangre, suero o plasma

32

 a un matraz 

Erlenmeyer de 50 mL y agregue 4.5 mL de solución de hidróxido de bario 0.06 M. Agite 

para mezclar y a continuación agregue lentamente 5.00 mL de solución de sulfato de zinc 

al 2.2%. Mezcle cuidadosamente y deje reposar 5 min. Filtre recibiendo en un matraz seco, 

o centrifugue en un tubo seco.

Prepare un filtrado en blanco y filtrados estándar de la misma manera usando 0.5 

mL de agua para el blanco y alícuotas de 0.5 mL de los estándares de trabajo.

Adicione con una pipeta una alícuota de 0.2 mL de cada uno de los filtrados en tubos 

de ensayo limpios y secos, y a intervalos de 30 s agregue 1.00 mL del reactivo de la en-

zima. De inmediato coloque los tubos en un baño de agua a 37

C (las reacciones pueden 

durar 45 min a temperatura ambiente, con cierta pérdida de sensibilidad). Corra alícuotas 

del filtrado problema por duplicado. Después de exactamente 30 min, saque los tubos uno 

por uno (a intervalos de 30 s) y agregue a cada uno 50 mL de H

2

SO

4

 3 M.

33

 El ácido 

sulfúrico detiene completamente la reacción enzimática.

Después de 5 min, pero antes de 1 h, determine la absorbancia de las soluciones a 

540 nm usando el blanco como referencia. Use una hoja de cálculo para trazar una curva 

de calibración, e informe los miligramos de glucosa/dL de su muestra.

Análisis por inyección de flujo

EXPERIMENTO 36  CARACTERIZACIÓN DE LOS PARÁMETROS 

FÍSICOS DE UN SISTEMA DE INYECCIÓN AL FLUJO

Acarreador

reactivo de bórax

0.01 

M

mL/min

1.2

Bomba

Naranja-naranja

S(0.002% BTB)

Válvula de

inyección

Efluente

bórax 0.01 

M

1.2 Naranja-naranja

620

nm

32

 Se pueden usar preparaciones comerciales estándar séricas de control (como Versatol). Se pueden conseguir 

preparaciones con concentraciones “anormales” de glucosa, por lo que se puede cubrir el intervalo entre las con-

centraciones normales (90 mg/dL) a anormales (300 mg/dL).

Alternativamente, se pueden usar problemas con glucosa acuosa, en cuyo caso se elimina el paso de la precipitación 

de las proteínas y se adicionan 9.5 mL de agua en lugar del hidróxido de bario y la solución de sulfato de zinc.

33

 La reacción es de seudoprimer orden a bajas concentraciones de glucosa, pero se observa menor rapidez a altas 

concentraciones de glucosa. Así, la absorbancia puede no ser una función lineal del tiempo de incubación en al-

tas concentraciones.

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